双荧光素酶报告基因检测一

双荧光素酶报告基因检测一

双荧光素酶报告基因检测在科研领域广泛应用，涉及蛋白与蛋白互作、miRNA靶基因验证、转录因子调控验证、ceRNA研究等。该实验主要利用萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase）构建报告系统，具备高灵敏度、广动态范围和灵活应用等特点。

实验原理包括构建报告基因质粒，将研究的序列插入萤火虫荧光素酶基因，使其受到调控序列影响。处理细胞后，裂解并加入荧光素底物，荧光素酶催化底物产生荧光，通过测量荧光强度评估调控元件功能。引入Renilla荧光素酶作为内部对照，消除转染效率差异影响，提供更准确可靠数据。

荧光素酶发光机制基于ATP、Mg2+和O2催化荧光素氧化脱羧产生光子。北美萤火虫的荧光素酶蛋白活性显著，无需修饰即可表现完全酶活性。发光过程中生成的氧化荧光素发出550-580nm波长荧光。

实验步骤涵盖载体构建、转染质粒、细胞裂解、底物添加和荧光检测。通过计算荧光素酶比值，评估不同处理对基因转录调控的影响。

双荧光素酶实验具体应用包括验证microRNA与mRNA、lncRNA的靶向互作，分析启动子结构和SNP，评估信号通路激活情况。卡梅德生物提供完善的细胞培养平台和双荧光素酶标记基因检测服务。

此文章旨在为科研爱好者提供参考，内容详尽，适用于需要了解双荧光素酶实验原理、应用及操作步骤的研究人员。如有侵权内容，建议立即删除。2024-10-08