荧光素酶报告基因系统则通过将启动子序列克隆到荧光素酶之前,检测转录因子与启动子的相互作用。该系统具有检测灵敏度高、操作方便、稳定性好等优点,为研究基因启动子和转录因子调控机制提供了强大工具。具体应用中,研究者可构建报告基因质粒,将靶基因启动子插入荧光素酶前,与转录因子质粒共转染细胞。若...
机制研究利器!荧光素酶报告系统!
研究表观调控机制,荧光素酶报告系统成为利器。基因的复杂结构,包括编码区、前导区和尾部区,以及侧翼顺序,前导区作为调控基因表达的顺式作用元件,包含启动子、增强子等。
顺式作用元件与反式作用因子结合,后者为调控基因表达的因子,其结构包含DNA结合结构域和转录活化结构域。转录因子作为反式作用因子的重要组成,能被诱导表达,通过与启动子或特定的顺式作用元件结合,调控基因的表达。
荧光素酶报告基因系统则通过将启动子序列克隆到荧光素酶之前,检测转录因子与启动子的相互作用。该系统具有检测灵敏度高、操作方便、稳定性好等优点,为研究基因启动子和转录因子调控机制提供了强大工具。
具体应用中,研究者可构建报告基因质粒,将靶基因启动子插入荧光素酶前,与转录因子质粒共转染细胞。若转录因子激活靶启动子,则荧光素酶表达量增加,检测荧光强度即可判断作用强度。同时,使用内参对照质粒,如带有海肾荧光素酶的pRL-TK,减少实验误差,确保测试结果准确性。
例如,J Hematol Oncol发表的一项研究使用荧光素酶报告系统检测双特异性抗体对TGF-β信号的阻断效果,结果显示双特异性抗体显著抑制了TGF-β1信号,对抗癌治疗具有协同效果。
逐典萤光素酶报告基因系统专为不同检测需求设计,具有高灵敏度、稳定性好、操作简便等特点。检测不同细胞刺激后,通过梯度稀释的测试剂进行信号检测,确保研究结果的准确性和可靠性。2024-09-04