荧光素酶报告基因系统:萤火虫荧光素酶:在ATP、Mg2?和O?条件下,通过氧化发光反应展现黄绿色荧光,作为主报告基因,用于评估目的基因的效果。海肾荧光素酶:发光需要腔肠素和O?,发出蓝色荧光,常作为内参来校准实验误差,如细胞数量或转染效率不一致。双荧光素酶报告系统的优势:利用两种酶的特异性,通...
看完这篇文章,我不信您还搞不定「双荧光素酶报告实验」
双荧光素酶报告实验是一种有效的基因表达调控研究方法,通过萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的共表达来评估目的基因的效果。以下是关于双荧光素酶报告实验的要点:
荧光素酶报告基因系统:
萤火虫荧光素酶:在ATP、Mg2?和O?条件下,通过氧化发光反应展现黄绿色荧光,作为主报告基因,用于评估目的基因的效果。海肾荧光素酶:发光需要腔肠素和O?,发出蓝色荧光,常作为内参来校准实验误差,如细胞数量或转染效率不一致。双荧光素酶报告系统的优势:
利用两种酶的特异性,通过共表达在细胞中,分别检测并减小外界因素对实验的干扰。可应用于转录因子启动子和miRNA靶基因的研究中,通过比较萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的比值来评估启动子活性或miRNA的调控效应。实验流程:
准备目的细胞。进行质粒转染。检测荧光素酶的活性,通过比较两种荧光素酶的比值来分析实验结果。实验注意事项:
对照组的设置:确保实验的客观性和准确性,需要设置合适的对照组。数据处理:将Firefly/Renilla的比值作为luciferase表达的相对值,以排除操作误差。常见问题及解决方法:如荧光过高或过低,需要采取相应的策略进行调整,确保实验结果的可靠性。通过遵循上述要点和注意事项,可以有效地进行双荧光素酶报告实验,从而准确评估目的基因在基因表达调控中的作用。
2025-04-14