细胞的基础呼吸状态，即rotenone和antimycin A测试，揭示部分酶的耗氧，是测定线粒体功能的关键指标。A) 初探糖酵解：首次加入葡萄糖后，ECAR飙升，展现了细胞基础的糖酵解能力。B) 激活糖酵解潜力：oligomycin加入后，ECAR增加，反映出细胞的最大糖酵解潜能。C) 验证来源：2-DG抑制糖酵解，ECAR降低...
如何解读生化检验报告单？
揭示Seahorse数据统计分析的秘密：OCR与ECAR深度解读
Seahorse能量代谢分析仪是细胞代谢研究的利器，通过精准测量细胞的耗氧率（OCR）和胞外酸化率（ECAR），为我们揭示细胞能量生成和利用的全貌。OCR，如同细胞的呼吸计，追踪着细胞对氧气的消耗，通过溶解氧变化和噻唑类试剂的监测，揭示线粒体的活力与能量需求。
关键步骤揭秘：
细胞的基础呼吸状态，即rotenone和antimycin A测试，揭示部分酶的耗氧，是测定线粒体功能的关键指标。A) 初探糖酵解：首次加入葡萄糖后，ECAR飙升，展现了细胞基础的糖酵解能力。B) 激活糖酵解潜力：oligomycin加入后，ECAR增加，反映出细胞的最大糖酵解潜能。C) 验证来源：2-DG抑制糖酵解，ECAR降低，确保数据源于糖酵解而非其他途径。观察ECAR下降，可能由糖酵解储备或非糖酵解产生的酸化揭示。数据校准与质量控制：
OCR检测细胞密度在20-160的范围，确保数据的代表性。背景孔一致性要求±20，确保实验的准确性。细胞孔压力保持在120-170，防止压力异常影响数据。ECAR测量时，pH值的准确性至关重要。使用如Wave软件（安捷伦细胞分析软件）进行数据查看，通过对比图2.13（ECAR与OCR的对立趋势揭示代谢动态），标准化校正（2.14节）处理不均细胞密度，从而更好地理解代谢状态。图2.15展示OCR与ECAR的整体概览，以及实验数据的呈现，确保孔温与环境温度相近。
在数据导出时，选择合适的工具如GraphPad Prism，务必注意背景校正和标准化（3.1节）。3.2-3.4图深入展示了OCR的详细分析，包括总览和详细图例，帮助我们更深入地剖析数据。
最后，利用图3.5的Assay Parameter per Well功能，评估每个孔的统计可靠性和对比性。强烈推荐使用GraphPad进行图形和统计分析，确保研究的严谨性。关于Seahorse数据分析的视频教程，你可以在B站找到详尽的教学资源，助你掌握每一个步骤和技巧。
掌握OCR与ECAR的Seahorse分析，如同探索细胞代谢的微观世界，每一次测量都揭示着生命能量的微妙变化。
2024-07-05
