PCR操作范例及反应体系的组成主要包括以下部分:1. DNA模板: 根据实验需要选择特定的DNA样本作为模板。2. 特异性引物: 设计与DNA模板特定区域互补的引物,引物的序列直接影响PCR的特异性。3. 多聚酶: 加入适量的多聚酶,如Taq酶,用于催化DNA链的延伸。多聚酶的用量需根据DNA模板的量、反应的特异性...
根据实验需求设计96孔板的布局,确保每个样品和每个目的基因都有足够的重复孔。按照布局逐一加样,注意避免交叉污染和误差。示例96孔板布局:上机操作:将配置好的反应液放入实时qPCR仪中。设置相应的温度循环和采集模式,进行扩增检测。real-time qPCR不需要常规PCR的三步法(变性、退火、延伸),由于产物长度...
聚合酶链反应的详细实验操作步骤如下:1. 实验准备 准备实验材料:PCR仪、Eppendorf高速冷冻离心机、电泳仪、凝胶成像仪、电泳级琼脂糖、GenGreen核酸染料、2×PCR Mix、正向及反向引物、无菌水以及模板DNA。2. 建立PCR反应体系 体系配置:在无菌的PCR管中建立20μL的PCR反应体系,其中包括市售的2×PCR ...
将测序结果提交至EzBioCloud或NCBI Standard Nucleotide BLAST数据库进行比对,确定细菌的种类和分类地位。二、真菌菌种鉴定1. 实验步骤1. 真菌基因组抽提 使用索莱宝真菌基因组DNA提取试剂盒,按照产品说明书进行操作。2. ITS PCR 选用擎科生物TSINGKE TSE101金牌Mix (green)作为PCR反应体系。引物:使用ITS...
RT-PCR实验全解析 一、实验原理 RT-PCR,全称反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR),是将RNA的反转录(reverse transcription)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。在试管内,以变性、退火、延伸三个基本反应为一个循环,反复重复这种循环,使DNA得以扩增...