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花粉萌发及花粉管生长观察实验
被子植物是现今世界上最进化、分布最广的植物类群。被子植物的一个重要特征就是其具有真正的花，被子植物因此也被称为有花植物。开花、传粉和受精是被子植物生命史中重要的生理过程。在被子植物的有性繁殖过程中，当花粉落到雌蕊柱头上后，花粉开始萌发并且生长出花粉管。花粉管穿过花柱到达胚珠，最后到达胚囊。随后花粉管末端破裂并释放出两个精细胞，其中一个与卵细胞融合为受精卵，另一个与极核融合形成受精极核。这个过程被称为双受精，双受精是被子植物特有的生理过程。花粉萌发和花粉管生长是被子植物有性繁殖过程中的重要步骤。本实验将体外培养麝香百合（ Lilium longiflorum Thunb.）的花粉并对其萌发及花粉管生长情况进行观察，同时考察某些因素（比如硼酸和钙离子）对这一过程的影响。
1.植物材料
本研究选用的植物材料为麝香百合。麝香百合的花粉体积大，萌发率高，便于体外培养和观察，是研究花粉和花粉管结构和生长的理想材料。
试剂和用具
Ca(NO3)2，乙二胺四乙酸二钠 (Ethylene Diamine Tetraacetic Acid Disodium salt, EDTA•Na2)，硼酸，蔗糖，电子天平，量筒 (100 ml, 500 ml)，烧杯，搅拌子，搅拌器，称量纸，空气恒温振荡器，锥形瓶，玻璃棒，培养皿，标签纸，移液器（5 ml，1 ml，50 ul），蓝色及黄色枪头，显微镜(带目镜测微尺)，物镜测微尺，计数器，吸水纸，废物缸
2.实验方法
（1）花粉的采集
每日清晨采集尚未开裂的百合花药，阳光照射约1小时，放入干燥器中过夜。次日，花药完全开裂并明显萎缩，花粉全部暴露在外。用干净的小毛刷收集充分干燥的花粉，分装、密封在小管中，存于-80℃冰箱中。
（2）平衡和花粉的吸湿
将活花粉放入-80℃环境中可长期保持其活力。为了使花粉从-80℃环境中取出后在常温下仍保持活性并萌发，需要将-80℃冻存的花粉分别在-20℃、4℃和室温下各平衡半小时。温度平衡后即可对花粉进行吸湿操作：取一套培养皿，在较小的培养皿中放进数张滤纸，用水浸湿，然后在滤纸上放一块大小合适的锡箔纸，将花粉转移到锡箔纸上，最后盖上较大的培养皿，室温静置2个小时以上 。
（3）花粉在液体培养基中萌发
按照5 mg/ml的比例将花粉加入到液体培养基中。用玻璃棒搅拌去除花粉壁上的大量脂类物质。花粉萌发可以分为少量培养和大量培养：
少量培养
取直径在5厘米左右的小培养皿，加入4 ml花粉培养液，放入空气恒温振荡器内以100 rpm左右的转速在25℃下振荡培养5个小时左右。
大量培养
使用专用的花粉大量培养器培养，可以进行相当大量的花粉萌发。或简化为将花粉培养物置入一长圆柱的玻璃容器内，通过气泵从容器底端不断鼓入新鲜空气，于室温（25℃）培养。
本实验采用少量培养的方法培养花粉。
（4）硼酸，钙离子等对花粉萌发和花粉管生长的影响
配置100 mM的Ca(NO3)2、100 mM的EDTA•Na2和1%的硼酸做为储液，在花粉培养液中加入适量储液以配制各种培养条件。将花粉培养液按照少量培养的方法进行培养。每个培养条件做两个平行样品。
（5）花粉萌发和花粉管生长的观察
将振荡培养的花粉培养皿从空气振荡器中取出。首先肉眼观察各个培养条件下的花粉管萌发情况。在某些培养条件下可以观察到有花粉聚成一团，这说明花粉萌发较多并且花粉管较长。如果花粉很分散，则说明萌发率较低或者花粉管长度较小。然后根据这个标准初步比较平行样品的相似度。如果相似度较好，则说明结果较为可信。将花粉培养皿置于显微镜4倍或者10倍物镜下观察花粉的萌发情况（不要用40倍物镜，这样会弄脏镜头）。统计各个培养条件下的花粉萌发率，同时观察花粉管的形态特征，总结各种培养条件对花粉萌发和花粉管生长的影响。在统计花粉萌发率时，如果花粉萌发很多并且花粉管长度很长则很难精确统计花粉的萌发率。这种情况下只要求给出大致的范围即可。

附：
百合（Lilium longiflorum）花粉液体培养基 （Dickinson 1968）
Ca(NO3)2•4H2O 1.29 mM
KNO3 0.99 mM
H3BO3 0.16 mM (~0.01% w/v)
可以将上述培养基配制成20倍的储液，于4℃可以保存1个月。使用前加入终浓度为10%的蔗糖。2009-08-11

嘿！作业是自己做的！！
你这个成绩是计算的期末的成绩的，对吧！？这样做，成绩也是别人的，你这种人实在太假了！2009-08-05

论文？自己写2009-08-06

分太少，造假要像样，自己写。2009-08-09