接着进行细胞裂解及荧光检测，检测过程包括使用裂解Buffer、萤火虫荧光素酶反应液、海肾荧光素酶反应液，记录荧光值。案例分析 案例1：检测ZmNAC49是ZmMUTE转录的激活子还是抑制子。实验方案包括构建报告基因载体及靶基因表达载体，载体构建过程中推荐使用同源重组方法。将载体转化至烟草叶片中，测定LUC和REN信...
干货 | 双荧光素酶报告基因检测如何助力转录因子研究? 一、双荧光素酶报告系统的基本原理 双荧光素酶报告基因检测系统由萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成。这两种荧光素酶在正常转录后即具有活性，无需额外的修饰。其中，海肾荧光素酶作为转染的内参，用于减少孔间细胞数量和转染效率对实验结果的影响。通过特定的荧光检测仪检测荧光量，可以判断酶的活性，进而...
双荧光素酶实验(植物) 双荧光素酶检测基于萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase，FLuc）和海肾荧光素酶（Renilla Luciferase，RLuc）的活性检测。萤火虫荧光素酶可以催化荧光素发出生物荧光，而海肾荧光素酶则作为内参使用，以减少实验条件变化对结果的影响。在实验中，通常将带有海肾荧光素酶基因的质粒与报告基因质粒（含有萤火虫荧光...
加尾信号的摘要 方法将F-Luc与R-Luc两种荧光素酶基因插入同一质粒,构建带有双荧光素酶报告基因的载体Dual-Luc。在F-Luc基因后分别插入正向和反向互补的SV40poly(A)信号序列,得到2个带有不同SV40poly(A)信号的载体Dual-Luc2、Dual-Luc3。将其分别转染常用的3类细胞株293、L-02和HeLa细胞,应用双荧光素酶标仪和反转...
实验干货 | 双荧光素酶报告基因实验 双荧光素酶报告基因实验基于两种自然存在的荧光素酶，它们能够催化特定底物并发出荧光。在实验中，F-Luc通常作为主报告基因，用于评估目标启动子的活性；而R-Luc则作为内部控制，帮助校正实验的变异因素，如细胞数量和转染效率等。通过比较F-Luc和R-Luc的相对活性，研究者可以获得关于基因表达调控的可靠信息...
