常见的报告基因包括以下几种:氯霉素乙酰基转移酶:特点:作为第一个检测细胞内转录活性的基因,它在哺乳细胞中无内源性表达。检测方法:通过检测其催化氯霉素解毒的能力来判断基因活性,可用同位素、荧光或酶联免疫吸附测定法检测。注意事项:线性范围和灵敏性相对较弱。β半乳糖苷酶:来源:编码于大肠杆菌...
β半乳糖苷酶是另一种常用报告基因,编码于大肠杆菌的lacZ基因,其易于通过免疫组织化学观察。使用ONPG或CPRG底物检测其酶活性,ONPG灵敏度较低,而CPRG更高。荧光素酶,如细菌荧光素酶、萤火虫荧光素酶和Renilla荧光素酶,因其非放射性和高效性,尤其适合哺乳细胞研究。Promega的pGL3载体提供了分析转录活性...
常见的报告基因包括: 荧光素酶:来自萤火虫的荧光基因,其酶活性在特定条件下能产生荧光,是快速且广泛应用的检测工具。 氯霉素乙酰转移酶:通过催化氯霉素的乙酰化提供检测方法,虽然放射性检测手段复杂,但非放射性方法也日益流行。 β半乳糖苷酶:作为内部对照,用于检测其他报告基因的表达,具有简单易测...
常见的报告基因种类繁多,例如氯霉素乙酰基转移酶基因(CAT)、人生长激素基因(hGH)、分泌型碱性磷酸酶基因(SEAP)等。CAT适用于体外分析,hGH作为分泌型报告基因,可用ELISA试剂盒直接检测蛋白水平,适合高通量实验。SEAP则是通过酶活性检测,一步法和两步法生物发光法都有应用,灵敏度相对较低。以绿色荧光蛋...
(1)最常用的报告基因大多是编码抗生素抗性蛋白的基因,通过检查产物是否具有抗生素的抗性来确定基因的表达情况。(2)氯霉素乙酰基转移酶(CAT):该报告基因来源于大肠杆菌转位子9,是第1个用于检测细胞内转录活性的报告基因。氯霉素乙酰基转移酶可催化乙酰CoA的乙酰基转移到氯霉素3羟基,而使氯霉素解毒。C...