分泌型碱性磷酸酶(SEAP)是胎盘碱性磷酸酶的突变体，无需裂解细胞即可检测，PNPP和黄素腺嘌呤二核苷酸磷酸作为底物，可分别提供低和高灵敏度的测定方法。荧光蛋白家族，如绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)，无需辅助因子即可发出荧光，为研究细胞内事件提供了无损手段。选择报告基因时，需考虑其灵敏度...
报告基因列举几种常见的报告基因
基因检测中，几种常见的报告基因用于评估基因表达情况。首先，氯霉素乙酰基转移酶(CAT)作为第一个检测细胞内转录活性的基因，它在哺乳细胞中无内源性表达，通过检测其催化氯霉素解毒的能力来判断基因活性。CAT的活性可用同位素、荧光或酶联免疫吸附测定法检测，但其线性范围和灵敏性相对较弱。
β半乳糖苷酶是另一种常用报告基因，编码于大肠杆菌的lacZ基因，其易于通过免疫组织化学观察。使用ONPG或CPRG底物检测其酶活性，ONPG灵敏度较低，而CPRG更高。荧光素酶，如细菌荧光素酶、萤火虫荧光素酶和Renilla荧光素酶，因其非放射性和高效性，尤其适合哺乳细胞研究。Promega的pGL3载体提供了分析转录活性的工具，荧光素酶在哺乳细胞的半衰期短，便于实时检测基因表达变化。
分泌型碱性磷酸酶(SEAP)是胎盘碱性磷酸酶的突变体，无需裂解细胞即可检测，PNPP和黄素腺嘌呤二核苷酸磷酸作为底物，可分别提供低和高灵敏度的测定方法。荧光蛋白家族，如绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)，无需辅助因子即可发出荧光，为研究细胞内事件提供了无损手段。
选择报告基因时，需考虑其灵敏度、稳定性以及监测范围。对于基因转录动力学研究和高通量筛选，稳定性好的基因如CAT和荧光素酶更为适合，而对于定性基因转移研究，可能需要结合使用多种报告基因以获取更全面的信息。
扩展资料报告基因 (reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
2024-05-28
