一、双荧光素酶报告基因检测原理 双荧光素酶报告基因检测系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)主要包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶两部分。其中,萤火虫荧光素酶在ATP、二价镁离子(Mg2+)、氧气(O2)等存在的情况下,会催使底物萤火虫荧光素发生氧化,产生波长540~600 nm的黄绿色荧光信号。而海肾...
一、双荧光素酶报告系统的基本原理 双荧光素酶报告基因检测系统由萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成。这两种荧光素酶在正常转录后即具有活性,无需额外的修饰。其中,海肾荧光素酶作为转染的内参,用于减少孔间细胞数量和转染效率对实验结果的影响。通过特定的荧光检测仪检测荧光量,可以判断酶的活性,进而...
综上所述,双荧光素酶报告基因实验是一种灵敏、高效的检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用以及microRNA对靶基因调控的方法。通过构建报告基因质粒、共转染细胞、检测荧光素酶活性等步骤,可以实现对基因表达调控机制的深入研究。
双荧光素酶报告基因检测实验是一种基于荧光素酶与其底物反应产生荧光的特性,用于检测基因调控过程变化的实验方法。该实验通过构建包含萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)和海肾荧光素酶(Renilla Luciferase)的报告质粒,实现对基因表达调控的精确分析。一、实验原理 双荧光素酶系统:萤火虫荧光素酶催化荧光...
双荧光素酶报告基因实验的原理基于含有萤火虫荧光素酶的基因和海参荧光素酶的基因被包含在一个质粒(如pmirGLO Vector、Psicheck-2)上。通过质粒构建,将包含结合位点的目的片段(野生型WT、突变型Mut)构建在萤火虫荧光素酶的基因或海参荧光素酶的基因的后面。在双荧光素酶试剂盒中,荧光素和腔肠素分别...