实验所需器材包括裂解液、蛋白酶抑制剂、匀浆器、离心机、BCA蛋白定量试剂、还原型蛋白上样缓冲液、玻璃板、制胶器、电泳槽、电泳液、NC膜、脱脂牛奶、一抗、二抗、TBST缓冲液、化学发光底物、ChemiScope 6100设备。实验步骤 实验分为四个阶段：总蛋白提取、蛋白变性、SDS-PAGE电泳与转膜、免疫反应与化学...
WB蛋白质印迹法Western blot实验方法及检测报告模板
实验器材与主要试剂
实验所需器材包括裂解液、蛋白酶抑制剂、匀浆器、离心机、BCA蛋白定量试剂、还原型蛋白上样缓冲液、玻璃板、制胶器、电泳槽、电泳液、NC膜、脱脂牛奶、一抗、二抗、TBST缓冲液、化学发光底物、ChemiScope 6100设备。
实验步骤
实验分为四个阶段：总蛋白提取、蛋白变性、SDS-PAGE电泳与转膜、免疫反应与化学发光分析。
总蛋白提取阶段，将细胞样品加入裂解液并添加蛋白酶抑制剂，随后进行匀浆处理，并在冰上裂解30分钟。通过高速离心分离上清，即得到总蛋白溶液。随后使用BCA定量试剂确定蛋白浓度，并调整样本浓度。
蛋白变性阶段，将蛋白溶液与还原型蛋白上样缓冲液以4:1比例混合，沸水浴变性10分钟，然后保存于-20℃冰箱备用。
SDS-PAGE电泳阶段，清洗玻璃板，制胶与上样。将玻璃板自然晾干后，组装制胶器，配制不同浓度的分离胶和浓缩胶，完成灌胶与梳子插入。电泳至溴酚蓝底部约1cm，进行转膜。
转膜阶段，准备滤纸与NC膜，将分离胶置于滤纸上，将NC膜盖于其上，进行转膜。条件为湿转175mA，1.5小时。
免疫反应阶段，快速涮洗转印膜，加入脱脂牛奶封闭，随后进行一抗与二抗孵育，最后通过化学发光底物进行化学发光分析。
化学发光与分析阶段，将化学发光底物试剂混合后涂于NC膜表面，使用ChemiScope 6100进行信号采集与灰度分析。
实验结果
实验结果包括WB上样排版与抗体稀释比例，具体结果请参见“原始曝光图片”。
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