1. 基本原理： 荧光素酶的应用：荧光素酶，如Photinus pyralis萤火虫体内的荧光素酶，在化学反应中能产生生物荧光，因此被广泛用于实验研究中。 双报告系统：在双荧光素酶报告基因检测中，一个荧光素酶作为实验基因的表达指标，另一个作为内对照，以消除实验条件变化带来的误差。2. 实验设计与构建： 目的...
【实用干货】双荧光素酶报告基因检测
双荧光素酶报告基因检测是一种通过比较两个荧光素酶基因的表达变化来精确评估调控因素对基因表达影响的实验方法。以下是关于双荧光素酶报告基因检测的详细解答：
1. 基本原理： 荧光素酶的应用：荧光素酶，如Photinus pyralis萤火虫体内的荧光素酶，在化学反应中能产生生物荧光，因此被广泛用于实验研究中。 双报告系统：在双荧光素酶报告基因检测中，一个荧光素酶作为实验基因的表达指标，另一个作为内对照，以消除实验条件变化带来的误差。
2. 实验设计与构建： 目的基因调控序列与荧光素酶基因融合：将目的基因的调控序列与荧光素酶基因融合，构建出质粒。 载体选择：常用的载体如pRLTK和pGL3Basic，分别作为内参和实验基因的载体。此外，pmirGLO载体则将两种荧光素酶整合在同一个质粒上，简化了实验步骤。
3. 实验流程： 质粒制备：制备含有目的基因调控序列的荧光素酶质粒和内参质粒。 共转染细胞：将这两种质粒共转染到细胞中。 细胞处理与荧光检测：使用特定检测试剂处理细胞，并通过荧光检测仪器读取两种荧光素酶的荧光信号。 数据分析：根据荧光强度的差异来评估调控因素对基因表达的影响。
4. 应用价值： 精确评估调控作用：双荧光素酶报告基因检测能够精确评估如miRNA等调控因素对靶基因表达的影响。 细胞研究中的实用价值：通过该方法，可以验证特定基因与miRNA之间的调控关系，为细胞研究提供有力支持。
综上所述，双荧光素酶报告基因检测是一种基于荧光素酶特性的精确评估基因表达调控的实验方法，具有广泛的应用价值。
2025-03-30
